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實時熒光定量PCR服務

簡要描述：實時熒光定量PCR服務實時熒光定量PCR技術與常規PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點。實時定量PCR是指在PCR指數擴增期間通過連續監測熒光信號強弱的變化來即時測定特異性產物的量，并據此推斷目的基因的初始量，不需要取出PCR產物進行分離。

  • 更新時間：2026-03-20
  • 廠商性質：代理商
  • 訪  問  量：1596

詳細介紹

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一、核心流程（標準 4 步法）

  1. 總 RNA 提取
    Trizol 法或試劑盒，測濃度與純度

    • OD260/280：1.8–2.1 合格

  2. 反轉錄（cDNA 合成）
    RNA → 反轉錄酶 → cDNA
  3. qPCR 擴增
    常用體系：

    • 2×SYBR Green Mix

    • 上游引物 + 下游引物

    • cDNA 模板

    • 補水至 20 μL

反應程序：

  • 95℃ 30s

  • 95℃ 5s → 60℃ 30s，40 個循環

  • 熔解曲線

  1. 數據分析

    2?^ΔΔCt 法

    內參基因：β-actin、GAPDH、18S

二、結果怎么表達

  • mRNA 相對表達量

  • 目的基因 / 內參基因

  • 以對照組為 1 進行歸一化

四、常用的基因分

  • 炎癥：TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1

  • 纖維化：TGF-β1、α-SMA、Col1A1、FN

  • 凋亡：Bax、Bcl-2、Caspase3

  • 氧化應激：Nrf2、HO-1、NQO1

  • 干性標志物：Nestin、SOX2、Oct4

  • 腎損傷：KIM-1、NGAL



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