10-12周齡雌性大鼠卵巢顆粒細胞的原代培養
更新時間:2026-03-31 點擊次數:1547
1. 10-12周齡雌性SD大鼠,皮下注射孕馬血清促性腺激素(Pregnant Mare Serum Gonadotropin,PMSG) 60IU,48h后頸椎脫臼處死。
2. 大鼠浸入75%乙醇浸泡5-10分鐘,轉移到通風柜中的解剖盤中。
3. 在距離大鼠脊柱1cm、肋下1cm的交叉位置剪開皮膚、肌肉,可見白色的脂肪組織,拉出脂肪組織,可見到粉紅色的卵巢,摘除卵巢。
4. 取卵巢放入預冷的含雙抗的緩沖液中,用緩沖液清洗卵巢三次,去除周圍組織及表面包膜。
5. 在解剖顯微鏡下用1mL的注射器刺破卵泡,釋放顆粒細胞。
6. 將懸液通過70μm篩網過濾至50ml離心管中,之后200g,離心7min。
7. 計數,種植到24孔板和大皿中。
8. FSHR表達鑒定顆粒細胞。
大鼠卵巢顆粒細胞是卵巢卵泡內的主要功能細胞,圍繞卵母細胞分布,具有分泌雌激素、孕激素、抑制素等激素的功能,參與卵泡發育、成熟及排卵的調控過程,是研究卵巢生理功能、生殖內分泌調控、卵巢相關疾病發病機制及藥物篩選的理想細胞模型。大鼠卵巢顆粒細胞原代培養的核心原理是:通過無菌操作獲取大鼠卵巢組織,分離卵泡并剝離顆粒細胞,采用酶解結合機械吹打的方式分散細胞,經離心洗滌、過濾純化去除雜質及死細胞,將純化后的活細胞接種于培養瓶/皿中,在適宜的營養條件和培養環境下,使細胞貼壁生長、增殖,獲得純度高、活性好的原代卵巢顆粒細胞。動物細胞原代培養是直接從機體取得細胞、組織進行培養的技術,卵巢顆粒細胞作為貼壁生長細胞,培養關鍵在于全程無菌操作、精準控制酶解條件,減少細胞損傷,優化培養環境,確保細胞貼壁率和活力,避免污染、細胞聚集或脫壁。