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細胞周期檢測技術

Name: 細胞周期檢測技術
Brand: 其他品牌
Availability: InStock

簡要描述：細胞周期檢測技術：細胞周期是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結束所經歷的全過程，分為間期與分烈期兩個階段。細胞周期反應了細胞增殖速度。單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細胞群體的周期，故現多采用其他方法測群體周期測定細胞周期的方法很多，常用的是PI滲入測定細胞周期。

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細胞周期檢測技術實驗步驟

實驗共分以下4個主要步驟:

1.細胞鋪盤

HeLa S3細胞，密度為80%左右分盤，使鋪盤密度在50%左右，為滿足流式細胞儀上機要求，細胞數目需大于1x10°/組。

2.細胞同步化處理:

a)加入終濃度2mM的Thymidine同步化18h

b) 用溫育的PBS洗4次，更換新鮮培養基，培養9h

c) 再加入2mM Thymidine再次同步化18h后

3.樣品收集 ;

a) 分別收取釋放2h(S期)，6h(G2/M期)和12h(G1期)細胞樣品

b) 每個樣品收取都使用預冷的PBS洗滌4次，1000g離心5min，棄上清

c) 100uL PBS重懸沉淀，吸取出細胞懸液于移液器中，于移去細胞的管中加入900uL預冷的70%乙醇，漩渦振蕩器震蕩中滴

入細胞懸液。

d)4℃固定一小時或更長時間。

e)1500rmp，離心10min，去固定液。

f)細胞染色液配制:50xRNaseA母液:50xPI母液:PBS=20:20:960;RNaseA母液濃度1mg/mL，工作濃度20ug/mL;PI母液濃度2.5mg/mL，工作濃度50ug/mL。

g) 細胞37度染色1h。根據細胞量，加入一定體積的細胞染色液(1~1.5mL)重懸，使上機時細胞通過率為200~350Cell/s,染色液不可過多或過少，過多則細胞密度過低上機速度嚴重不足，過少則導致細胞粘結。

h) 300目篩網過濾至流式管中。

4.上機檢測;

流式細胞儀上機檢測，計數50000個細胞。

5.同步化數據分析

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