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和 Co-IP 區別:
IP:富集單個目標蛋白
Co-IP:富集蛋白復合物,檢測相互作用
富集低豐度蛋白,方便 Western blot 檢測
檢測蛋白磷酸化、泛素化、乙?;?/span>等修飾
純化蛋白用于質譜、酶活實驗
驗證抗體特異性
細胞裂解
非變性 / 溫和變性裂解液,加蛋白酶 / 磷酸酶抑制劑
預清除
加 Protein A/G 磁珠,減少非特異結合
免疫沉淀
加目標蛋白一抗,4℃ 孵育過夜
結合磁珠
加 Protein A/G 磁珠,4℃ 結合 2–4 h
洗滌
洗 3–4 次,去除雜蛋白
洗脫
上樣緩沖液煮沸,做 Western blot 或質譜
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