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麥胚凝集素染色技術(shù)服務(wù)

簡(jiǎn)要描述:麥胚凝集素(WGA)是從谷物中提取出來,可以特異性的結(jié)合心肌細(xì)胞膜上的一種糖蛋白,二者結(jié)合起來可以將心肌細(xì)胞膜染出來。WGA可以把心肌細(xì)胞膜染出來,這樣是否肥大的細(xì)胞,從圖像與正常組的對(duì)比就可以看出,也可以用專門的軟件對(duì)染出的細(xì)胞進(jìn)行直徑,面積等的測(cè)是,能夠分析心肌細(xì)胞是否肥大。

  • 更新時(shí)間:2026-03-21
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 訪  問  量:1101

詳細(xì)介紹

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原理與標(biāo)記類型

  1. 分子基礎(chǔ):WGA 為 36 kDa 左右的植物凝集素,有雙糖結(jié)合位點(diǎn);未透化時(shí)主要標(biāo)記細(xì)胞膜外糖基,透化后可標(biāo)記高爾基體等細(xì)胞內(nèi)糖基化結(jié)構(gòu);琥珀酰化 WGA 可增強(qiáng)對(duì) β-GlcNAc 的選擇性。

  2. 熒光 WGA 染色(常用):直接偶聯(lián) FITC、Alexa Fluor 系列,熒光顯微鏡 / 共聚焦觀察,適合活細(xì)胞、快速定位;

  3. 酶標(biāo) WGA 染色:偶聯(lián) HRP/AP,DAB/BCIP-NBT 顯色,普通光鏡可見、可保存;

  4. 生wu素化 WGA + 鏈霉親和素系統(tǒng):信號(hào)放大,適合低表達(dá)樣本。

標(biāo)準(zhǔn)操作流程

  1. 樣本準(zhǔn)備

    • 活細(xì)胞:PBS 輕洗,勿透化;

    • 石蠟切片:脫蠟→水化→3% H?O?阻斷內(nèi)源性酶;

    • 冰凍切片:固定(4% 多聚甲醛)后 PBS 洗。

  2. 封閉與孵育:1% BSA 封閉 15–30 分鐘;熒光 WGA 工作液(5 μg/mL 左右,PBS 配制)室溫避光 10–20 分鐘(活細(xì)胞 37℃);

  3. 洗滌:PBS 3 次 ×5 分鐘,徹di去除未結(jié)合 WGA;

  4. 復(fù)染與封片:DAPI 染核,抗淬滅封片劑封片;酶法需加底物顯色后脫水透明封片。

關(guān)鍵注意點(diǎn)與優(yōu)化

  • 透化禁忌:純細(xì)胞膜標(biāo)記嚴(yán)禁先透化(Triton X-100 會(huì)讓 WGA 進(jìn)入胞內(nèi));需同時(shí)染核 / 胞內(nèi)蛋白時(shí),優(yōu)先染 WGA 再短暫低濃度透化;

  • 濃度與時(shí)間:過高濃度或過長(zhǎng)孵育會(huì)導(dǎo)致非特異背景;建議做 1、5、10 μg/mL 濃度梯度;

  • 對(duì)照:設(shè)置同型糖(0.2 M GlcNAc)競(jìng)爭(zhēng)抑制對(duì)照,驗(yàn)證特異性;

  • 毒性:活細(xì)胞染色后及時(shí)洗滌,避免 WGA 長(zhǎng)時(shí)間作用影響細(xì)胞活力。


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