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簡要描述：免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質(zhì)印跡（Western blotting），是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。
更新時間：2026-03-20廠商性質(zhì)：代理商訪 問 量：1629產(chǎn)品分類
Product Category詳細(xì)介紹
| 品牌 | 其他品牌 |
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蛋白提取（組織 / 細(xì)胞）
BCA 蛋白定量
制膠 + 上樣電泳
轉(zhuǎn)膜（濕轉(zhuǎn) / 半干轉(zhuǎn)）
封閉
一抗孵育
二抗孵育
ECL 化學(xué)發(fā)光顯影
灰度分析（ImageJ）
組織 / 細(xì)胞加入含蛋白酶抑制劑 + 磷酸酶抑制劑的 RIPA 裂解液
冰上裂解 30 min
4℃ 12000 rpm 離心 10 min，取上清
按試劑盒做標(biāo)準(zhǔn)曲線
測 OD 值，計算蛋白濃度
統(tǒng)一上樣量（通常 20–30 μg / 孔）
加 5×Loading buffer，煮沸 10 min 變性
分離膠：8%–12%（根據(jù)分子量）
濃縮膠：5%
電泳：
濃縮膠：80 V
分離膠：120 V
至溴酚藍(lán)跑到底
常用 0.22 μm/0.45 μm PVDF 膜
甲醇活化膜 1 min
濕轉(zhuǎn)：250 mA 60–90 min
半干轉(zhuǎn)：15–25 min（看儀器）
5% 脫脂牛奶或 BSA
室溫?fù)u床 1 h
按說明書稀釋（1:500–1:2000 常見）
4℃ 搖床過夜
TBST 洗膜 3×10 min
羊抗兔 / 羊抗鼠 HRP 二抗
1:5000–1:10000 稀釋
室溫 1 h
TBST 洗膜 3×10 min
ECL 發(fā)光液 A:B 1:1 混合
均勻滴在膜上，化學(xué)發(fā)光儀成像
ImageJ 測灰度值
目的蛋白 / 內(nèi)參（GAPDH/β-actin/Tubulin）
統(tǒng)計相對表達(dá)量
纖維化：α-SMA、Col1、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad3
炎癥：TNF-α、IL-1β、NF-κB p65、p-p65、IκBα
凋亡：Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase3、Caspase3
氧化應(yīng)激：Nrf2、HO-1、SOD1
代謝 / 糖尿病：PPARγ、PI3K、Akt、p-Akt
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