實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)

簡(jiǎn)要描述：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

更新時(shí)間：2026-03-20
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實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

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Real-Time PCR引物設(shè)計(jì)的要求

1Tm=55~65℃

2 GC=30~80%

3 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度:引物的產(chǎn)物大小不要太大，一般在80~300 bp之間都可。

4 引物的退火溫度要高，一般要在60 ℃以上。

五、cDNA與引物質(zhì)量檢測(cè)

選擇特異性好，擴(kuò)增效率高的引物作為實(shí)時(shí)熒光使用引物。

六、利用相對(duì)定量的方法分析目的基因表達(dá)量的情況:

常用的看家基因有B-actin，GAPDH，18S rRNA

七、定量PCR檢測(cè)

八、擴(kuò)增曲線和溶解曲線

溶解曲線全部為單峰表明為特異性擴(kuò)增，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段;熒光背暑信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。

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