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一、RNA的提取
二、DNase|消化樣品RNA 中的DNA
三、RNA瓊脂糖凝膠電泳
四、RNA反轉錄為cDNA
Real-Time PCR引物設計的要求
1Tm=55~65℃
2 GC=30~80%
3 PCR擴增產物長度:引物的產物大小不要太大，一般在80~300 bp之間都可。
4 引物的退火溫度要高，一般要在60 ℃以上。
五、cDNA與引物質量檢測
選擇特異性好，擴增效率高的引物作為實時熒光使用引物。
六、利用相對定量的方法分析目的基因表達量的情況:
常用的看家基因有B-actin，GAPDH，18S rRNA
七、定量PCR檢測
八、擴增曲線和溶解曲線
溶解曲線全部為單峰表明為特異性擴增，熒光擴增曲線可以分成三個階段;熒光背暑信號階段，熒光信號指數擴增階段和平臺期。
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