免疫組化染色技術(shù)服務(wù)

簡要描述：免疫組化概述：免疫組化，也稱免疫組織化學(xué)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。是指應(yīng)用免疫學(xué)基本原理即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原，對其進(jìn)行定位、定性及相對定量的研究。

更新時間：2026-03-21
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實驗技術(shù)服務(wù)

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一、試劑與耗材

石蠟切片
二甲苯、梯度乙醇
3% H?O?
抗原修復(fù)液（檸檬酸鹽緩沖液 pH6.0 常用）
PBS
一抗、二抗（HRP 標(biāo)記）
DAB 顯色液
蘇木素、返藍(lán)液
中性樹膠封片劑

二、完整步驟

脫蠟至水
二甲苯 Ⅰ、Ⅱ 各 10min → 100%、95%、85%、75% 乙醇各 5min → 水洗。
滅活內(nèi)源性過氧化物酶
3% H?O? 室溫 10–15min → PBS 洗 3 次 ×3min。
抗原修復(fù)（關(guān)鍵）
檸檬酸鹽緩沖液微波 / 水浴煮沸 10–15min，自然冷卻至室溫 → PBS 洗 3 次 ×3min。
封閉
5%–10% 正常山羊 / 兔血清（根據(jù)二抗來源）室溫 20min，甩干，不洗。
一抗孵育
滴加一抗，4℃過夜或 37℃ 1h → PBS 洗 3 次 ×5min。
二抗孵育
滴加 HRP 標(biāo)記二抗，37℃ 20–30min → PBS 洗 3 次 ×5min。
DAB 顯色
新鮮配制 DAB，鏡下控制顯色（1–5min），出現(xiàn)棕黃色即可終止 → 流水沖洗。
蘇木素復(fù)染
蘇木素染核 1–3min → 水洗 → 1% 鹽酸酒精分化 → 流水返藍(lán)。
脫水透明封片
75%→85%→95%→100% 乙醇各 2min → 二甲苯透明 → 中性樹膠封片。

三、結(jié)果判斷

陽性：目標(biāo)部位出現(xiàn)棕黃色顆粒
細(xì)胞核：藍(lán)色
背景應(yīng)干凈，無非特異性染色

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