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流式雙標實驗

簡要描述：流式雙標實驗是伊萊博生物細胞平臺較為成熟的實驗技術(shù)服務(wù)之一，由本公司經(jīng)驗豐富的實驗人員操作完成。

更新時間：2026-03-20
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流式雙標實驗是伊萊博生物細胞平臺較為成熟的實驗技術(shù)服務(wù)之一，由本公司經(jīng)驗豐富的實驗人員操作完成。

一、什么是流式雙標

同時檢測2 個表面抗原，用來區(qū)分細胞亞群

常用組合舉例：

CD3/CD4 → 總 T 細胞、CD4+T
CD3/CD8 → 總 T 細胞、CD8+T
CD4/CD25 → Treg
F4/80/CD11b → 巨噬細胞
CD11c/MHC-II → 樹突狀細胞
IL-4/IFN-γ → Th1/Th2（胞內(nèi)染色）

二、實驗材料

單細胞懸液（脾細胞、PBMC、BALF、組織消化）
流式抗體：FITC/PE/APC/PerCP 任意兩種不同熒光
流式染色緩沖液（PBS+1% FBS/BSA）
紅細胞裂解液（血 / 脾樣本必需）
96 孔 U 型板 / 流式管
流式細胞儀

三、標準操作步驟（表面雙標）

1. 細胞制備

組織研磨 → 200 目濾網(wǎng)過濾
離心 1200 rpm × 5 min
加紅細胞裂解液，室溫裂解 5 min
終止裂解，洗滌 2 次
調(diào)整細胞濃度：1×10? / 管

2. 封閉 Fc 受體（關(guān)鍵，減少非特異）

加 CD16/32 封閉抗體
4℃ 10 min

3. 雙熒光抗體染色

每管加入兩種熒光抗體（按說明書體積）
輕輕混勻，4℃避光孵育 20 min

4. 洗滌

加染色緩沖液，離心棄上清
重復(fù) 1～2 次

5. 重懸上機

200～400 μL 重懸，上機檢測

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流式雙標實驗

一、什么是流式雙標

二、實驗材料

三、標準操作步驟（表面雙標）

1. 細胞制備

2. 封閉 Fc 受體（關(guān)鍵，減少非特異）

3. 雙熒光抗體染色

4. 洗滌

5. 重懸上機

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