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Brdu免疫熒光染色

簡(jiǎn)要描述:Brdu免疫熒光染色 BrdU是另外一種胸腺嘧啶核苷類似物。它也能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復(fù)制的DNA分子,通過基于EdU與Apollo熒光染料的特異性反應(yīng)檢測(cè)DNA復(fù)制活性,通過檢測(cè)EdU標(biāo)記便能地反映細(xì)胞的增殖情況。

  • 更新時(shí)間:2026-03-20
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 訪  問  量:1161

詳細(xì)介紹

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一、原理

BrdU(溴脫氧尿苷)是胸腺嘧啶類似物,可在S 期摻入新合成 DNA
通過抗 BrdU 抗體 + 熒光二抗標(biāo)記,熒光陽性細(xì)胞 = 正在增殖 / 近期增殖的細(xì)胞

二、適用樣本

  • 細(xì)胞爬片(體外培養(yǎng)細(xì)胞)

  • 冰凍切片 / 石蠟切片(小鼠腦組織、腫瘤、腸黏膜、肝臟等)


三、標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)步驟(免疫熒光法)

1. BrdU 標(biāo)記

  • 細(xì)胞:加入終濃度 10–50 μM BrdU,孵育 2–24 h

  • 動(dòng)物:腹腔注射 50–100 mg/kg,2 h 后取材

2. 固定

4% PFA 固定 15–30 min → PBS 洗

3. 通透與變性(關(guān)鍵步驟)

  • 0.2% Triton X-100 通透 10 min

  • 2N HCl 37℃ 變性 30 min(解開 DNA 雙鏈,暴露 BrdU)

  • 0.1M 硼酸鈉中和 10 min

4. 封閉

10% 山羊血清室溫封閉 1 h

5. 一抗孵育

Mouse anti-BrdU 一抗
4℃ 過夜

6. 熒光二抗

FITC/PE/Cy3 熒光二抗
室溫避光 1 h

7. 復(fù)染與封片

DAPI 染核(藍(lán)色)
抗熒光淬滅封片


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