一、核心定義與特征

1. 細胞譜系完整：包含吸收性腸上皮細胞、杯狀細胞、潘氏細胞、腸內分泌細胞及持續增殖的 Lgr5?干細胞；

2. 極性與結構：形成囊狀 / 隱窩 - 絨毛樣結構，上皮頂端朝向管腔，基底側貼附基質；

3. 功能齊全：具備營養吸收、黏液分泌、消化酶表達、藥物代謝、屏障功能；

4. 穩定：可連續傳代、凍存復蘇，維持數月功能，保留供體遺傳背景。

二、主流構建方法與關鍵流程

1. 成體隱窩 / 干細胞來源（經典、快，Clever 團隊 2009 年）

1. 樣本處理：手術 / 活檢小腸組織，4℃ PBS 清洗，刮除黏膜黏液，剪碎至 1 mm3；

2. 隱窩分離：EDTA / 膠原酶消化，冰上孵育分離隱窩，過濾后離心富集；

3. 包埋培養：Matrigel 包埋，滴成穹頂狀聚合；培養基核心因子：Wnt3a、R-spondin1、EGF、Noggin（WENR）；人源常需額外加 TGF-β 抑制劑（A83-01）、p38 抑制劑；

4. 成模與傳代：7 天左右形成囊狀類器官，機械 / 酶解傳代（每 7–10 天一次）。

• 特點：成模快、純度高、適合腸道疾病與感染模型；小鼠體系成熟，人源需精細調控。

2. iPSC/ESC 分化來源（無限供源、基因編輯友好）

• 路線：iPSC→內胚層（Activin A）→后腸（FGF4+Wnt3a）→腸管→小腸類器官；

• 關鍵因子：BMP4、RA（視huang酸）定向小腸分化；后續加入 WENR 維持；

• 特點：可用于遺傳性腸病（如囊性纖維化）、基因修復研究，無倫理限制，但分化周期長（4–6 周）。

3. 進階共培養體系

• 多細胞組裝：加入成纖維細胞、內皮細胞、免疫細胞（如巨噬細胞、T 細胞），構建血管化 / 免疫健全的類器官；

• 氣液界面 / 微流控培養：提升成熟度，增強屏障功能與絨毛分化，更適合藥物轉運與屏障損傷模型。