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詳細介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
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?樣本處理?
需取大鼠心臟組織，去除周圍血管和結締組織，經4%多聚甲醛固定后石蠟包埋或OCT包埋冷凍切片58
新生大鼠心臟需用D-Hanks液沖洗殘留血細胞，組織塊消化采用0.08%蛋白酶分次消化4
?主要試劑與儀器?
一抗（如心鈉素抗體、Col Ⅰ/Ⅲ抗體）、二抗、DAB顯色試劑
需準備CO?培養箱、倒置顯微鏡、離心機等設備
?切片制備?
石蠟切片厚度建議5μm，需經脫蠟、水化及抗原修復處理
冷凍切片需避免反復凍融，厚度通常為8-10μm
?免疫染色?
阻斷內源性過氧化物酶（3% H?O?）
血清封閉后滴加一抗（4℃過夜）
二抗孵育及DAB顯色
采用ABC法或PAP法，步驟包括：
熒光染色需避光操作，常用熒光二抗標記
?對照設置?
需設陰性對照（PBS替代一抗）和陽性對照（已知陽性組織）
?顯微鏡觀察?
心鈉素陽性顆粒主要分布于心房肌細胞胞質，右心耳表達
膠原纖維（Col Ⅰ/Ⅲ）可通過Masson染色輔助評估纖維化程度
?圖像處理?
使用圖像分析軟件定量陽性信號面積或光密度值
組織固定時間不超過24小時，避免抗原丟失
蛋白酶消化新生心肌細胞時需嚴格控制時間（次8分鐘，后續2分鐘/次）
力竭運動模型可能影響心鈉素表達，需規范動物分組
如需特定蛋白（如P物質、心房肽）的檢測方法，可進一步結合熒光染色或乙醛酸誘發熒光法
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