一、實驗前準備?

1. ?樣本來源?

• ?人類樣本?：關節置換術獲取的滑膜組織（RA、骨關節炎或創傷患者）
  

• ?小鼠樣本?：C57BL/6小鼠髖關節周圍滑膜組織
  

2. ?試劑與耗材?

• 消化酶：0.5% IV型膠原酶（人類）或Pancreatin?（小鼠）
  

• 培養基：DMEM/F12 + 10% FBS + 1%雙抗
  

• 器械：眼科剪、鑷子、200目細胞篩、15ml離心管
  

?二、組織處理與消化?

1. ?組織清洗?

• 人類樣本：PBS沖洗去除血液，剔除脂肪及壞死組織
  

• 小鼠樣本：75%乙醇浸泡5分鐘后剝離滑膜
  

2. ?消化方法?

• 剪碎組織后加入0.5% IV型膠原酶，37℃振蕩消化60分鐘（人類）
  

• 小鼠滑膜需額外渦輪振蕩1.5分鐘以提高細胞釋放率
  

• ?酶消化法?：

• ?組織塊法?：將1mm3組織塊直接貼壁培養，48小時后補充培養基

?三、細胞培養與純化?

1. ?初次培養?

• 消化產物經100μm濾網過濾，離心（1000rpm, 5分鐘）后重懸接種

• 培養條件：37℃、5% CO?，換液時間為接種后3小時（去除未貼壁細胞）

2. ?差速貼壁純化?

• 傳代時采用Pancreatin?短時消化（30秒-1分鐘），優先收集成纖維細胞（巨噬細胞殘留較少）

• 通過3次傳代（15-20天）可去除99%的滑膜巨噬細胞

?四、鑒定與質量控制?

1. ?形態學鑒定?

• 原代SFs呈梭形，核橢圓形，貼壁生長

• 混雜的圓形巨噬細胞隨傳代逐漸消失

2. ?免疫標記?

• Vimentin陽性（＞98%）、CD68陰性（流式或免疫熒光）

?五、注意事項?

• ?污染控制?：滑膜組織含血管豐富，需加強雙抗處理

• ?消化優化?：膠原酶濃度過高（＞1%）可能導致細胞活性下降

• ?培養基選擇?：含20% FBS可促進初期貼壁，但需逐步降至10%以避免過度增殖

?六、應用方向?

• ?RA研究?：通過SFs侵襲實驗模擬滑膜炎病理過程
  

• ?藥物篩選?：測試抗纖維化或抗炎藥物對SFs活性的影響