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3-4周齡雌性大鼠卵巢顆粒細(xì)胞的原代培養(yǎng)

更新時(shí)間:2026-03-31      點(diǎn)擊次數(shù):1621

1. 3-4周齡雌性SD大鼠,皮下注射孕馬血清促性腺激素Pregnant Mare Serum GonadotropinPMSG 60IU48h后頸椎脫臼處死。

2. 大鼠浸入75%乙醇浸泡5-10分鐘,轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤中。

3. 在距離大鼠脊柱1cm、肋下1cm的交叉位置剪開皮膚、肌肉,可見白色的脂肪組織,拉出脂肪組織,可見到粉紅色的卵巢,摘除卵巢。

4. 取卵巢放入預(yù)冷的含雙抗的緩沖液中,用緩沖液清洗卵巢三次,去除周圍組織及表面包膜。

5. 在解剖顯微鏡下用1mL的注射器刺破卵泡,釋放顆粒細(xì)胞。

6. 將懸液通過70μm篩網(wǎng)過濾至50ml離心管中,之后200g,離心7min

7. 計(jì)數(shù),種植到24孔板和大皿中。

8. FSHR表達(dá)鑒定顆粒細(xì)胞。

大鼠卵巢顆粒細(xì)胞是卵巢卵泡內(nèi)的主要功能細(xì)胞,圍繞卵母細(xì)胞分布,具有分泌雌激素、孕激素、抑制素等激素的功能,參與卵泡發(fā)育、成熟及排卵的調(diào)控過程,是研究卵巢生理功能、生殖內(nèi)分泌調(diào)控、卵巢相關(guān)疾病發(fā)病機(jī)制及藥物篩選的理想細(xì)胞模型。大鼠卵巢顆粒細(xì)胞原代培養(yǎng)的核心原理是:通過無菌操作獲取大鼠卵巢組織,分離卵泡并剝離顆粒細(xì)胞,采用酶解結(jié)合機(jī)械吹打的方式分散細(xì)胞,經(jīng)離心洗滌、過濾純化去除雜質(zhì)及死細(xì)胞,將純化后的活細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶/皿中,在適宜的營養(yǎng)條件和培養(yǎng)環(huán)境下,使細(xì)胞貼壁生長、增殖,獲得純度高、活性好的原代卵巢顆粒細(xì)胞。動物細(xì)胞原代培養(yǎng)是直接從機(jī)體取得細(xì)胞、組織進(jìn)行培養(yǎng)的技術(shù),卵巢顆粒細(xì)胞作為貼壁生長細(xì)胞,培養(yǎng)關(guān)鍵在于全程無菌操作、精準(zhǔn)控制酶解條件,減少細(xì)胞損傷,優(yōu)化培養(yǎng)環(huán)境,確保細(xì)胞貼壁率和活力,避免污染、細(xì)胞聚集或脫壁。


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