雙熒光素酶報告基因檢測實驗服務(wù)是一種廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)研究的技術(shù)服務(wù)，主要用于基因表達調(diào)控、miRNA靶基因驗證、啟動子活性分析等領(lǐng)域
。以下是該服務(wù)的核心內(nèi)容和技術(shù)要點：

一、服務(wù)內(nèi)容

1. ?miRNA靶基因驗證?

• 將預(yù)測的mRNA/lncRNA靶序列插入報告基因載體，通過熒光素酶活性變化驗證miRNA的靶向作用

• 常用載體：psiCHECK2（R-Luc 3'UTR插入靶序列，F(xiàn)-Luc作內(nèi)參）

2. ?啟動子活性分析?

• 通過截短或突變啟動子區(qū)域（通常2kb片段），檢測熒光素酶活性變化以確定功能區(qū)域

• 常用載體：pGL3-Basic（F-Luc上游插入啟動子）

3. ?轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控驗證?

• 共轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)錄因子表達載體與啟動子報告載體，通過活性變化分析調(diào)控關(guān)系

4. ?ceRNA機制研究?

• 驗證lncRNA/circRNA通過競爭miRNA調(diào)控靶基因的表達

二、實驗流程

1. ?載體構(gòu)建?：將目標(biāo)序列（如啟動子、UTR等）克隆至報告載體

2. ?細胞轉(zhuǎn)染?：使用高效轉(zhuǎn)染試劑（如LipoFiter）或病毒系統(tǒng)

3. ?雙熒光檢測?：

• 裂解細胞后，依次加入LARII（測F-Luc活性）和STOP&GLO Reagent（測R-Luc活性）

4. ?數(shù)據(jù)分析?：以F-Luc/R-Luc比值校正轉(zhuǎn)染效率，計算相對活性

三、服務(wù)優(yōu)勢

• ?預(yù)測支持?：部分提供商免費提供實驗前的結(jié)合位點預(yù)測服務(wù)

• ?定制化方案?：可針對不同樣本定制質(zhì)粒或miRNA mimics

• ?高靈敏度檢測?：采用均質(zhì)法輝光型試劑盒（如Promega），減少操作誤差

四、應(yīng)用案例

• ?案例1?：驗證某miRNA抑制靶基因表達，熒光素酶活性下降50%以上

• ?案例2?：發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子X通過結(jié)合啟動子Y的-500bp區(qū)域增強表達

五、注意事項

• 實驗需設(shè)置背景對照、陰性對照及陽性對照

• 使用底部透明的96孔板以避免轉(zhuǎn)板誤差