脊髓神經元原代培養是一種從動物胚胎或新生個體的脊髓組織中分離并體外培養具有功能活性的神經元細胞的技術。該技術廣泛應用于神經發育、神經退行性疾?。ㄈ缂∥畇側索硬化癥ALS、脊髓損傷修復）、突觸可塑性、神經藥理學及神經毒性研究等領域。由于脊髓神經元為終末分化細胞，因此原代培養是研究其生理與病理機制的重要手段。

　　脊髓神經元原代培養的技術操作流程：

　　1、組織分離與解剖

　　在冰浴HBSS中快速取出胚胎或新生鼠的脊柱。

　　在顯微鏡下沿脊柱背側切開，小心剝離腦膜和周圍結締組織。

　　取出脊髓，置于冰預冷新鮮HBSS中漂洗2–3次，去除血膜和殘余組織。

　　2、組織消化

　　將脊髓組織剪碎成約1 mm³小塊。

　　加入預熱的胰蛋白酶溶液（37°C），消化15–25分鐘。

　　消化期間可輕柔吹打或振蕩以助解離。

　　3、終止消化與細胞懸液制備

　　加入含血清的培養基終止消化。

　　用移液管輕柔吹打組織塊10–15次，使細胞充分分散。

　　通過200目細胞篩網過濾，去除未消化的組織團塊。

　　離心（1000 rpm，5分鐘），棄上清。

　　4、細胞重懸與計數

　　用完q培養基（Neurobasal+B27+L-谷氨酰胺等）重懸細胞沉淀。

　　臺盼藍染色法進行活細胞計數，確?；盥?gt;90%。

　　5、接種與培養

　　將細胞接種于預先包被PDL或PDL/Laminin的培養皿或蓋玻片上。

　　接種密度：1–5×10?cells/cm²（依實驗目的調整）。

　　培養條件：37°C、5%CO?、飽和濕度。

　　2–4小時后，可更換一次培養基，去除未貼壁的死細胞和碎片。

　　6、維持培養

　　每3–4天更換一半培養基（避免完q換液導致神經元脫落）。

　　可添加抗有絲分裂劑（如阿糖胞苷Ara-C,1–5μM）在培養第2–3天加入，抑制非神經元細胞（如膠質細胞）過度增殖。

　　培養周期：一般可維持14–21天，期間神經元可形成軸突、樹突和突觸連接。