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大鼠卵母細胞的采集及發(fā)育分型

更新時間:2026-03-31      點擊次數(shù):896
  大鼠超排可以用于研究環(huán)境污染物或藥物對生殖系統(tǒng)的毒性影響;通過誘導超排并觀察卵母細胞和胚胎的發(fā)育情況,可以評估潛在的生殖毒性。大鼠卵母細胞的發(fā)育過程可以分為3個階段:GV期、MI期、MⅡ期。
  方法
  1.雌性SD大鼠,腹腔注射PMSG 60IU,注射PMSG 46-48h后,腹腔注射hCG 20IU,誘導超排。
  2.準備卵母細胞培養(yǎng)滴:在60mm培養(yǎng)皿內(nèi)做若干水滴狀的滴,并用礦物油覆蓋,放入培養(yǎng)箱(37 ℃、5%CO2)平衡4h以上(過夜平衡)。
  3.卵母細胞采集的時間通常在SD大鼠注射hCG后13-16h內(nèi)進行。
  4.雌性SD大鼠背部、腹側(cè)備皮,酒精消毒背側(cè)、腹側(cè)皮膚。在距離大鼠脊柱1cm、肋下1cm的交叉位置剪開皮膚、肌肉,可見白色的脂肪組織,拉出脂肪組織,可見到粉紅色的卵巢,摘除卵巢及輸卵管,將其放入500μL的KSOM胚胎培養(yǎng)液液體中。
  5.在體式顯微鏡下觀察到輸卵管的上部(壺腹部)有一個明顯的膨大處。用鑷子固定輸卵管,用一根1 ml注射器縱向撕開壺腹部,用此法將其整個撕裂,卵團會游離到KSOM胚胎培養(yǎng)液液體中。
  6.在KSOM胚胎培養(yǎng)液中再加入同體積的透明質(zhì)酸酶溶液(0.6mg/mL),用移液槍輕輕吹打幾下,放入CO2培養(yǎng)箱中,1分鐘后取出。
  7.在顯微鏡下用移卵管收集卵母細胞到卵母細胞培養(yǎng)滴中,并用剩下的液滴逐步清洗,清洗結(jié)束后放回37℃ CO2培養(yǎng)箱中。
  8. GV期、MI期、MⅡ期的卵母細胞。
  GV:這是卵母細胞生長和發(fā)育的早期階段,卵母細胞處于減數(shù)分裂的次分裂前期。
  MI:卵母細胞進入減數(shù)分裂的次中期。
  MⅡ期:這是卵母細胞成熟的終階段,卵母細胞準備好受精
  注意事項:
  大鼠的輸卵管不直接與卵巢相連,而是緊貼卵巢表面,呈彎彎曲曲的形狀。大鼠輸卵管可分為漏斗部、壺腹部、峽部和子宮部。


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